准确评估您的起始样本，以及计算细胞回收率和检测细胞纯度，是评估任何细胞分选流程是否成功的关键步骤。无论您处理的是外周血单核细胞（PBMC）、脐带血、骨髓、组织来源的单细胞悬液还是任何其他细胞来源，本指南均提供了相关提示，帮助您确定细胞回收率和纯度，从而支持获得一致且可靠的结果。

为何要评估起始样本？

在细胞分选前立即预留一小部分起始样本非常重要。这将使您能够在分选前评估目的细胞的的起始纯度（即频率），并有助于准确计算分选后的细胞回收率。

起始样本中需评估的关键指标

为了准确评估起始样本并支持下游计算，评估以下参数非常重要：

• 总有核细胞（TNCs）：这是样本中含有细胞核的细胞总数。TNC计数界定了起始投入量，并与分选后的计数一起用于计算细胞回收率。
• 细胞存活率：这是样本中活细胞的百分比。在分选前测量存活率对于确定起始样本的质量，以及评估分选方法对细胞存活率的影响至关重要。
• 起始细胞纯度（%）：即目标细胞群在分选前样本中的占比（也称靶细胞频率）。该测量值有助于解释细胞纯度，并计算分选后的细胞回收率。

各种组织和细胞来源中的预期细胞频率可以根据历史和已发表的数据进行估算，但实际频率会因供体而异，并取决于样本是来自正常、疾病还是基因修饰的来源。为了辅助您的实验规划，推荐下载以下关于细胞类型频率的免费挂图作为参考：

什么是细胞回收率？

细胞回收率衡量的是细胞分选后目标细胞被保留的效率，它是评估流程性能和优化实验方案的关键指标。虽然常与相关术语连用，但区分它们很重要：

• 细胞回收率：分选后保留的靶细胞的百分比（效率）
• 细胞得率：分选后获得的靶细胞总数（产出）
• 细胞通量：可处理或获得的细胞或样本总数；在扩大流程规模或处理大体积样本时尤为相关

如何计算细胞回收率

计算细胞回收率需要四个关键数值，准确确定每个数值都至关重要：

1. 起始样本中的细胞总数
2. 起始样本中目标细胞的百分比（即起始细胞纯度）
3. 富集组分中的细胞总数
4. 富集组分中目标细胞的百分比（即最终细胞纯度）

如何准确进行细胞计数

有关细胞计数的更多详细信息，请参阅我们的实验方案及相关视频：

什么是细胞纯度？

细胞纯度是指样本中目的细胞的占比（即频率%）。它是评估分选过程有效性和富集组分质量的关键指标。

如何检测细胞纯度

细胞纯度是通过流式细胞术进行测量，即使用荧光抗体标记您的靶细胞，并通过设门（gating）策略识别它们。设门有助于分选出您感兴趣的细胞群，同时排除细胞碎片、死细胞和不需要的细胞类型，从而能够准确计算样本中靶细胞的百分比。这一测量步骤对于确认细胞分选性能，并确保您的样本适用于下游应用至关重要。

请参阅每种特定EasySep™试剂盒产品信息表中的“注意事项与提示”，以获取推荐的方法。某些正选试剂盒可能会引入抗体封闭效应；因此，遵循特定的说明对于准确评估纯度至关重要，例如：

• 使用合适的抗体克隆
• 在加入细胞分选抗体混合物的同时加入染色抗体
• 遵循试剂盒特定的染色说明