还在为找不到匹配您目标细胞的专属分选试剂盒而苦恼吗？STEMCELL Technologies 倾力推出多款间接选择试剂盒，旨在协助研究人员使用 EasySep™ 或 EasySep™ Release，实现对几乎任何细胞类型的定制化分选。只需选用任何生物素化或经 FITC、PE、APC 偶联的特异性抗体，即可对目标细胞进行表面标记。随后，严格按照 EasySep™ 操作流程将标记好的细胞悬液与相应的 EasySep™试剂充分混合，即可收获高纯度的目标细胞。

请参考以下操作建议，以保障您的目标细胞获得最理想的分选纯度与回收率：

• 确保细胞为单细胞悬液状态。
• 在细胞悬液中添加物种特异性的阻断剂，以最大程度地减少非特异性结合。欲深入了解 Fc 胞质受体（FcR）阻断剂的使用机制与重要性，请参阅技术指南： Importance of Using an FcR Blocker During Cell Separation Procedures .
• 建议对自身带有 Biotin 标签或荧光基团（FITC/PE/APC）的一抗进行梯度滴定。在筛选一抗的最佳工作浓度时，应通过梯度稀释确立一个平衡点：即在确保流式检测中的荧光峰移（荧光强度）已达到饱和最大幅度的前提下，尽可能选用最低的抗体工作浓度。为了保障分选纯度，该浓度染出来的阳性群体信号强度，应至少高出阴性背景 2 个数量级。推荐的一抗起始工作浓度一般在 0.3 - 3.0 µg/mL 之间，具体的最优配比需根据您目标细胞的初始比例进行灵活调整。  
  
  请根据样本中目标细胞的初始比例，选用相应的工作浓度：
  
  
  • 起始比例 < 10%，抗体工作终浓度推荐介于 0.3 - 0.5 µg/mL；
  • 起始比例为10-40%，抗体工作终浓度推荐介于 0.5 - 1.0 µg/mL；
  • 起始比例为40-60%，抗体工作终浓度推荐介于 1.0 - 2.0 µg/mL；
  • 起始比例>60%，抗体工作终浓度推荐介于 2.0 - 3.0 µg/mL*。
• 由于分选时加入的抗体已经占满了细胞位点，若在下游纯度检测时仍沿用同款抗体，可能会因为无法结合而测不准。这种情况下，您必须选用其他替代抗体进行染色。您可以选择以下两种方案：换一个细胞表面指标来测纯度；或直接用荧光二抗来测先前加入的一抗（例如，如果先前用的是小鼠来源抗体，这里可以直接加山羊抗小鼠的荧光二抗，如 GAM-FITC）。

需要进一步的帮助和信息，请联系techsupport@stemcell.com.

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